Gélose EMB: fondation, préparation et utilisation

La gélose EMB est un milieu de culture solide sélectif et différentiel utilisé pour l'isolement des bacilles à Gram négatif, principalement de la famille des Enterobacteriaceae, et d'autres bacilles à Gram négatif non exigeants. Il est également connu sous l'acronyme EAM, ce qui signifie éosine-méthylène bleu.

Ce milieu a été créé par Holt-Harris et Teague en 1916. Il contient de la peptone, du lactose, du saccharose, du phosphate dipotassique, de la gélose, de l'éosine, du bleu de méthylène et de l'eau. Elle ressemble beaucoup à la gélose MacConkey, en particulier si la gélose EMB modifiée par Levine est utilisée, laquelle ne contient pas de saccharose.

En fait, chaque laboratoire décide s’il fonctionne avec l’un ou l’autre, puisqu’ils remplissent la même fonction, bien qu’ils soient biochimiquement différents.

Il présente même le même inconvénient que la gélose MacConkey classique en termes d'essaimage produit par le genre Proteus. Par conséquent, pour éviter ce phénomène, la concentration en gélose peut être augmentée jusqu'à 5%.

Fondation

Sélectif

La gélose EMB est légèrement sélective car elle contient les colorants aniliniques (éosine et bleu de méthylène), qui agissent en tant qu'inhibiteurs, empêchant la croissance de la plupart des bactéries à Gram positif et de certains bacilles à Gram négatif exigeants.

Cependant, cette gélose présente l’inconvénient que certaines bactéries à Gram positif peuvent résister à la présence des substances inhibitrices et se développer en petites colonies incolores et incolores, telles que Enterococcus faecalis et certains Staphylococcus .

Vous pouvez également faire pousser certaines levures, telles que le complexe Candida albicans, qui donneront de très petites colonies roses. Les chlamydospores peuvent être développées à partir de cette levure si l’échantillon est semé en profondeur.

Différentiel

D'autre part, la gélose EMB est également un milieu différentiel, dans la mesure où ces colorants (l'éosine et le bleu de méthylène) ont la propriété de former un précipité à pH acide et servent donc d'indicateurs de sa production.

Par conséquent, les bactéries de lactose ou de saccharose à faible fermentation produisent des colonies pourpres en 24 à 48 heures. Par exemple, les genres Klebsiella, Enterobacter et Serratia.

Les bactéries qui fermentent fortement le lactose, telles que Escherichia coli, ou le saccharose, telles que Yersinia enterocolitica ou Proteus penneri, forment un précipité noir verdâtre qui confère à ces espèces un éclat métallique caractéristique.

Il est à noter que si l'on utilise du milieu lévé EMB (sans saccharose), Yersinia enterocolitica et Proteus penneri produiront des colonies claires.

Les bactéries qui ne fermentent ni le lactose ni le saccharose sont nourries par la présence de peptones, qui fournissent les acides aminés et l'azote nécessaires au développement bactérien, et produisent des colonies claires. Par exemple, les genres Salmonella et Shigella, entre autres.

De même, il est important de noter que le genre Acinetobacter peut présenter des colonies de bleu lavande, même s'il ne s'agit pas d'un fermenteur de lactose, ni de saccharose, mais ils ont la propriété de fixer le bleu de méthylène dans sa paroi cellulaire. Cela peut aussi arriver avec d'autres bactéries oxydantes.

préparation

Le milieu déshydraté d'origine est beige clair.

Pour préparer ce milieu de culture, il convient de peser 36 grammes de milieu déshydraté et de le mettre en suspension dans un flacon contenant un litre d'eau distillée.

Après avoir laissé le mélange au repos pendant 5 minutes, porter la fiole à une source de chaleur, en mélangeant vigoureusement et constamment jusqu'à ce qu'elle bout et qu'elle soit complètement dissoute.

Ensuite, le milieu de culture déjà dissous doit être stérilisé à l'autoclave à 121 ° C pendant 15 minutes.

À la fin du temps, il est retiré de l'autoclave et laissé reposer brièvement. Ensuite, il est servi même chaud (entre 45 et 50 ° C) entre 15 et 20 ml d'agar dans chaque boîte de Pétri stérile. Le médium devrait être le tournesol bleu.

Après avoir servi, les assiettes sont laissées légèrement à découvert jusqu'à ce que l'agar refroidisse un peu. Ensuite, ils sont couverts et autorisés à se solidifier complètement. Plus tard, ils sont commandés dans un porte-plaque inversé et conservés au réfrigérateur (8 ° C) jusqu'à leur utilisation.

Cette procédure est de préférence effectuée dans une hotte à flux laminaire ou devant le bec Bunsen pour éviter la contamination.

Il est important de garder à l’esprit que chaque établissement commercial indiquera le montant à peser pour préparer le milieu de culture.

Le pH final du milieu devrait être de 7, 2 ± 0, 2

Utilisations

Ce milieu est utilisé pour semer l’urine et les matières fécales ou tout type d’échantillons cliniques, en particulier si l’on suspecte la présence de bacilles à Gram négatif non exigeants, tels que les bacilles appartenant à la famille des Entérobactéries, qui poussent très bien dans ce milieu.

Les bactéries entéropathogènes des genres Shigella et Salmonella se distinguent par leurs colonies incolores ou légèrement ambrées.

D'autres bacilles de lactose non fermentants se développent également, tels que Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter, entre autres.

De même, ce milieu est très utile pour l’analyse microbiologique des aliments et de l’eau, car il est idéal pour la phase complète de confirmation de la détermination des coliformes, c’est-à-dire pour corroborer la présence d’ E. Coli dans des bouillons turbides de de la technique du nombre le plus probable (NMP).

Contrôle de qualité

Pour vérifier que le milieu de culture nouvellement préparé fonctionne bien, des souches de contrôle peuvent être plantées pour observer les caractéristiques des colonies et vérifier qu'elles sont conformes aux attentes.

Pour cela, des souches ATCC ou bien identifiées d' E. Coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa et certaines bactéries à Gram positif, telles que S. aureus, peuvent être utilisées .

E. coli devrait générer des colonies bien développées de couleur noir bleuâtre avec un lustre métallique vert. Alors que Enterobacter aerogenes et Klebsiella sp doivent donner des colonies muqueuses bien développées de couleur noir bleuâtre.

Par contre, Salmonella typhimurium et Shigella flexneri doivent développer de grandes colonies incolores ou légèrement ambrées.

Enfin, le genre Pseudomonas aeruginosa se développe en colonies incolores de taille irrégulière, alors que les bactéries à Gram positif doivent être totalement inhibées ou ne se développer que de manière modeste avec de très petites colonies.

Considérations finales

Parfois, la stérilisation provoque la réduction du bleu de méthylène, en observant un milieu orange. Pour que le bleu de méthylène s'oxyde et que la couleur pourpre se rétablisse, il faut mélanger doucement jusqu'à ce que la couleur reprenne.

De plus, après la stérilisation, le colorant peut précipiter, il faut donc bien le mélanger avant de servir les boîtes de Pétri.