Huile d'immersion: composition, caractéristiques, base et utilisation

L'huile d'immersion est un liquide visqueux et transparent ayant un indice de réfraction élevé. Pour cette raison, il est largement utilisé dans les observations microscopiques, car il offre la propriété de concentrer la lumière lorsqu'elle passe à travers l'objectif 100X du microscope, augmentant ainsi son pouvoir de résolution.

Ceci est dû à la formation d'un film visqueux entre la cible et le frottis, empêchant les rayons lumineux de se disperser lorsqu'ils atteignent l'air, concentrant les faisceaux lumineux vers l'échantillon.

L'huile d'immersion est utilisée uniquement avec l'objectif 100X. C'est pourquoi l'objectif 100X s'appelle également objectif d'immersion. Les autres sont appelés cibles sèches. Cet objectif ne peut pas être utilisé sans l'huile d'immersion, sans quoi la visualisation ne serait pas satisfaisante.

La fonction principale de l'huile d'immersion est de fournir des images plus claires, plus nettes et plus définies, permettant l'observation de détails qui ne seraient pas possibles avec d'autres objectifs.

La première huile utilisée à cette fin était l'huile d'anis, utilisée conjointement avec la première lentille à immersion créée par Giovanni Battista Amici. Cela évitait seulement l'aberration chromatique, mais n'augmentait pas l'ouverture numérique du système de lentilles.

Ensuite, l'huile de cèdre a été utilisée, mais elle présentait de nombreux inconvénients qui l'ont forcée à ne plus être utilisée. Parmi eux se trouvait sa forte acidité, qui a nui aux objectifs à court terme.

Par la suite, d’autres substances telles que l’eau et la glycérine ont été utilisées jusqu’à la création des huiles synthétiques d’immersion, qui ont été progressivement raffinées jusqu’à atteindre l’huile d’immersion actuelle, qui est un composé complexe de substances organiques.

Composition d'huile d'immersion

L'huile d'immersion est constituée d'un mélange de composés organiques tels que: terphényle, terphényle hydrogéné, hydrocarbures naturels et polybutènes.

Caractéristiques de l'huile d'immersion

L'huile d'immersion est un liquide jaune pâle, d'aspect légèrement visqueux, avec une odeur et une densité caractéristiques comprises entre 0, 92 et 0, 99 g / cm3.

L'huile d'immersion n'est pas soluble dans l'eau et a un point d'ébullition de 340 ° C. L'indice de réfraction a (n 20 ° C / D): varie de 1 482 à 1 516. De plus, l'indice d'inflammation est de 110 ° C et la viscosité oscille entre 100 et 120 mPa.s.

Ce produit doit être éliminé correctement, car il est écotoxique. En d’autres termes, il est nocif pour l’environnement et touche principalement les animaux aquatiques. Par contre, il irrite la peau et les muqueuses. Si ingéré, il est néphrotoxique et cardiotoxique.

L'huile d'immersion est stable entre 15 et 25 ° C, température à laquelle elle doit être stockée.

Bases de l'huile d'immersion

Lorsque vous utilisez des lentilles à fort grossissement, l'intensité de la lumière doit être augmentée. Cependant, bon nombre des faisceaux lumineux sont perdus car ils sont dispersés lorsqu'ils atteignent l'air (espace entre la lamelle et la lentille) et même certains rayons subissent une réflexion totale.

L'huile d'immersion a un indice de réfraction similaire à celui du verre. Par conséquent, lorsque l’huile est en contact entre l’objectif 100X et la lamelle, les faisceaux lumineux sont concentrés.

Les rayons concentrés traversent l'échantillon et augmentent la netteté de l'image, c'est-à-dire augmentent l'ouverture numérique de l'objectif et corrigent les aberrations chromatiques et sphériques.

Usages ou applications

L'utilisation d'huile d'immersion est particulièrement nécessaire lorsqu'il est nécessaire d'observer une image de manière plus large, en utilisant l'objectif de grossissement supérieur (objectif 100X) et ainsi de voir les détails essentiels pour établir un diagnostic.

Par conséquent, il est largement utilisé dans les études microscopiques de divers domaines tels que: l'histologie, la cytologie, l'hématologie et la bactériologie. Par exemple, il est utile pour étudier les caractéristiques des cellules et des tissus d'un patient.

Il sert également à l'analyse des frottis sanguins, où nous voulons détailler les caractéristiques des hémoparasites à l'intérieur et à l'extérieur des érythrocytes, ainsi que dans les préparations de Gram, afin de définir les caractéristiques morphotintoriales des microorganismes.

Il est généralement utilisé dans les préparations fixes, car il n'est pas recommandé dans les préparations fraîches. En effet, la tension superficielle de l'huile provoque le déplacement de la lamelle, ce qui provoque le déplacement de l'échantillon pendant son observation et empêche son analyse.

D'autre part, l'huile d'immersion n'est pas seulement utile en microscopie optique conventionnelle: elle est également utilisée dans les microscopes à fluorescence à réflexion interne totale (TIRFM) et dans les applications à fluorescence confocale.

Étapes à suivre pour observer une préparation avec de l'huile d'immersion

Pour voir une préparation au microscope, concentrez-vous d'abord sur la préparation avec l'objectif d'un grossissement inférieur, généralement 10 fois supérieur, avec une faible intensité lumineuse.

Ensuite, l'objectif de 40X est dépassé et le passage de la lumière est légèrement augmenté. Certaines analyses peuvent être effectuées avec cette augmentation, mais pour voir les détails structurels, vous avez besoin du grossissement 100X.

Avant de passer à l'objectif 100X, une goutte d'huile d'immersion est déposée sur la lamelle, juste à l'endroit où vous souhaitez l'observer, puis le revolver du microscope se déplace pour localiser l'objectif 100x dans la préparation.

L'intensité de la lumière est régulée (augmente) (déplacement du condenseur et ouverture du diaphragme). Ensuite, avec quelques petits mouvements qui sont donnés à la vis micrométrique (en avant ou en arrière) devrait parfaitement se focaliser si le microscope utilise des objectifs parafocaux.

Si vous essayez de vous concentrer directement sur la préparation avec l'objectif en immersion, vous rencontrerez peut-être des difficultés pour le faire. Ce n'est pas une action impossible, mais la difficulté augmente considérablement.

Soins

Pour utiliser l'huile d'immersion, certaines conditions doivent être prises en compte.

Lorsqu'une préparation colorée a été réalisée, telle qu'un frottis coloré avec du Giemsa ou un Gram, il est nécessaire d'attendre que le frottis soit complètement sec avant de déposer l'huile d'immersion. Sinon, l'huile et l'eau formeront des micelles qui ne permettront pas de visualiser la préparation.

D'autre part, après avoir observé le lot de préparations, c'est-à-dire qu'en fin de journée, l'objectif 100X doit être soigneusement nettoyé à l'aide d'un papier pour lentilles à l'éthanol. Si la lentille reste sale, l'huile sèchera dessus et il sera alors très difficile de l'enlever, endommageant ainsi le champ de vision.

De même, il faut tenir compte du fait que l'huile est inflammable et doit être tenue à l'écart des sources de chaleur (briquets). Il est important d'éviter de le chauffer au-dessus de 65 ° C.

Enfin, l'huile est un produit toxique. Par conséquent, le contact direct avec la peau et les muqueuses doit être évité, car il peut provoquer une légère irritation. Pour éviter les accidents, il est recommandé de manipuler des gants et des lunettes de sécurité.

En cas de contact avec l'huile, la zone doit être lavée à grande eau. Si l'huile gicle dans les yeux, il faut la laver de la même manière, en gardant les yeux ouverts. En cas d'ingestion accidentelle, il est important de boire de l'eau tiède et de provoquer des vomissements, en plus de consulter un médecin.